酶法检测腺嘌呤和鸟嘌呤试剂盒代测


腺嘌呤(6-氨基嘌呤)(I)和鸟嘌呤(2-氨基-6-羟基嘌呤)(Ⅱ)是辅酶、核苷、核苷酸及核酸的基本成分。

腺嘌呤又称维生素B4,6-氨基嘌呤,是组成DNA和RNA分子的四种核碱基的一种。腺嘌呤在体内主要以腺嘌呤核苷酸的形式存在。在体内代谢途径(metabolicpathways)中参与形成多种重要的中间物质,如ATP、NADP等。腺嘌呤为核酸和辅酶的组成成分,参与体内DNA和RNA的合成,为维持生物体代谢功能的必要成分。其作用是在白细胞缺乏时能促进白细胞的增生。

鸟嘌呤广泛存在于动、植物界。是核酸(DNA和RNA)的基本组分之一。鸟嘌呤是一种嘌呤衍生物,由具有共轭双键的稠合嘧啶-咪唑环系统组成。鸟嘌呤为组成核酸的重要碱基,是DNA和RNA中4种主要碱基之一,也是各种鸟苷酸的组成分。其N9与核糖或脱氧核糖C1以β-糖苷键连接而成鸟苷或脱氧鸟苷。鸟嘌呤也是天然的白色颜料,无毒。一般化妆品中均可使用,主要用作唇膏、指甲油和眼部化妆品的珠光剂。

腺嘌呤用途:

1.用于生产腺苷、ATP、ADP、抗艾滋病新药及维生素B4和植物生长激素6-苄基腺嘌呤等。

2.生化研究,药物分析,可防治各种原因引起的白细胞减少症。是核酸的组成成分,参与生物体内的RNA和DNA合成,当白细胞缺乏时,能促进白细胞增生。用于防治白细胞减少病,也用于急性粒细胞减少症。还可用于血液储存。注意:由于此药是核酸前体,故与肿瘤放疗或化疗并用时,应考虑它是否有促进肿瘤发展的可能性。注射时需溶于2ml磷酸氢二钠缓冲液中,缓慢注射,不能与其他药物混合注射。

3.是制备阿德福韦双特戊酰氧甲酯的一个重要的中间体。

一、酶法检测腺嘌呤

黄嘌呤氧化酶(XO,黄嘌呤:氧氧化还原酶,E.C.1.2.3.2)是一种低专一性的酶,能作用某些醛、嘌呤、蝶呤、嘧啶和偶氮嘌呤;腺嘌呤也是此酶的底物,因此有文献推荐了一种应用黄嘌呤氧化酶(XO)进行检测的方法。

生成的产物可在nm处测定其吸光率。但是由于此酶催化腺嘌呤反应的速度极慢(仅约黄嘌呤反应速度的4%),因此该法不十分灵敏。但是如果将此反应进一步和过氧物酶及荧光染料构成的荧光检测法偶联,则有可能使这种方法变得可行。

有文献建议用亚硝酸以化学方法使腺嘌呤脱氨变为次黄嘌呤,然后再通过XO检测产生的次黄嘌呤;

最后形成的尿酸可在nm测定;但是更灵敏的办法是进一步通过和过氧物酶及荧光染料进行偶联检测。

二、酶法检测鸟嘌呤

鸟嘌呤的检测可用鸟嘌呤酶(鸟嘌呤氨基水解酶,E.C.3.5.4.3)。此酶已有商品。

可在nm测定尿酸的吸光值,它和鸟嘌呤的含量成比例。兔肝酶作用鸟嘌呤的Km在pH7.7的焦磷酸-柠檬酸缓冲系统中为x10-5M。

由于鸟嘌呤酶反应受1-甲基鸟嘌呤等的于扰,因此可以预计到,上述方法将受来自黄嘌呤或次黄嘌呤的干扰。不过后二者的影响只要通过检测释放的NH就可解决,NH或者借助极测定,或者与谷氨酸脱氢酶(L-谷氨酸:NAD氧化还原酶(脱氨),EC.1.4.1.2反应偶联进行检测:

NADH的降低可通过吸光率(nm)测定,也可通过荧光度(入发射=nm)测定。



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